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低吸附離心管的一些關(guān)鍵點!

更新時間:2021-12-21    點擊次數(shù):3212

  低吸附離心管的一些關(guān)鍵點!


  低吸附離心管常用于對蛋白質(zhì)進行濃縮和除鹽操作,對色譜洗液和生理梯度片斷進行緩沖液交換或者除鹽操作,從細胞的細菌培養(yǎng)上清液或者溶菌液中回收生物分子。清洗和濃縮乳膠懸浮液,離心管通常不需要預處理即可使用,不過對于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白溶液來說,用膜濃縮,回收率常常是不定量的,雖然PES材料使非特異性吸附最小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時候會有問題,非特異性結(jié)合的程度隨著個別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同,含有帶電的或者疏水結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)更易于不可逆結(jié)合到不同表面。

  低吸附離心管離心時注意事項:避免過長時間或者高速離心,雖然我們產(chǎn)品有防死端設(shè)計,可避免過度離心造成膜表面干燥而造成不可逆吸附,避免過度濃縮,終體積越小,越容易因表面吸附而損失得率,離心后采用輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率,盡量避免TIPS接觸膜表面。

  對于低吸附離心管表面做鈍化預處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,大多數(shù)情況下,在濃縮稀釋蛋白溶液之前預處理柱子可以提高回收率,因為溶液可填滿膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點,鈍化的方法是預先用高容積的鈍化溶液預浸泡柱子一小時以上,蒸餾水沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以除去可能殘留在膜上的鈍化溶液,注意鈍化處理后別讓膜干了,如果要留待以后使用,需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。

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